Biotine wordt traditioneel tot de B-vitaminen gerekend. Vijf enzymen hebben biotine als cofactor nodig, alle zijn carboxylases, enzymen die een carboxylgroep (bicarbonaat, CO₂) in een molecule inbouwen. Meer bepaald komt biotine aan te pas bij:

• afbraak van valine, isoleucine, leucine, methionine, threonine en pyruvaat,
• opbouw van vetzuurketens.

Biotine is wateroplosbaar.